生物工程下游技术期末复习题(6)

老师给的

能改变其表面的化学性质，成为适用于不同分离模式的色谱填料。

1、 表面硅羟基的化学修饰

硅可以与诸多元素形成稳定的共价键，这是形成品种繁多的含硅化合物已经硅胶进行化学修饰的基础。硅羟基的化学修饰通常采取以下三种途径：

①通过氯化反应：除去了物理吸附水的硅胶，可以将硅羟基转化为活泼的表面硅氯基。

②通过氯硅烷与硅羟基的反应

通过氯硅烷可以将各种烷基链引入硅胶表面，特别是引入长链正烷基链或芳香基以制备反向固定相。

③通过烷氧基硅烷与硅羟基的反应

烷氧基硅烷与硅胶额可以进行缩合反应，使硅胶表面带上环氧基或氨基等官能团，在此基础上可以很方便的进一步进行反应或修饰。

2、 包敷与涂层

可以通过不同的途径以制备稳定的聚合物涂层，也可以将含双键的聚合物涂于硅胶表面，使其表面带上双键。令其与随后涂敷上去的第二单体进行共聚，便可在硅胶表面上形成致密的聚合物膜。

3、 整体修饰

所谓整体修饰，指的是利用不同官能团的卤代硅烷或烷氧基硅烷的水解、缩聚反应，以直接制出空间交联型、含不同R基的硅胶。

4、 硅烷化试剂

硅胶的化学修饰方法中，表面硅羟基的修饰仍然是主要的途径，所使用的组要试剂是各种取代硅烷，既硅烷化试剂。氯硅烷是常用的硅烷化试剂，但它有一些很明显的缺点。相比之下烷氧基硅烷对环境和人体的危害性要小的多。

2、 蛋白质工程中，常用的蛋白质复性方法

蛋白质工程中常会遇到包含体问题，包含体基本是由蛋白质组成，其中大部分是克隆表达的产物，这些产物在一级结构上是正确的，但在立体构型上却是错误的，因此没有生物学活性。因此要涉及到蛋白质复性问题。蛋白质的复性主要有以下几种方法：

1、 稀释复性与透析复性

使蛋白质最常用的有两种方法。一种方法是将溶液稀释，导致变性剂浓度降低，蛋白质开始复性。

另一种方法是用透析、超滤或电渗析除去变性剂。

2、 色谱复性

色谱复性的方法很多，且原理各不相同，依据其抑制凝聚的特点，将其分为两大类。一类是以凝胶过滤为代表的非吸附型色谱复性。另一类是吸附