二恶英中毒对AhR基因表达和自由基水平的影响(2)

二恶英中毒对AhR基因表达和自由基水平的影响

中国畜牧兽医　2009年第36卷第12期生理生化 37

度计、UV755B紫外可见分光光度计、Olympus显微镜(日本)、MoticamBA400病理图像分析仪。1.3　动物分组与处理　清洁级SD大鼠72只,雌

2.1.2　血清抗氧化系统(T2SOD)各指标测定结果

　由图2可知。Ⅰ、Ⅲ组血清中T2SOD水平明显高

于Ⅱ组,差异极显著(P<0.01)

。

雄不限,体重(200±20)g,由昆明医学院实验动物科提供。临床确认健康后,单笼、颗粒饲料预饲养3d,自由饮水,编号并随机分成3组:Ⅰ组为正常对照

组(n=24),腹腔注射等量生理盐水;Ⅱ组为Dioxin

染毒组(n=24),染毒剂量为50μg/kg,质量浓度为25μg/mL,采用一次性腹腔注射给药;Ⅲ组为染毒Dioxin加自由基清除剂保护组(n=24),和给药方式同上组,FRS给药。

1.4　　34、8、12、166只大鼠采血后,采集肝脏,

分别放入2.5%戊二醛溶液、10%中性福尔马林,制备肝脏组织切片(方福德等,1995;季建平,2000)。1.5　血清MDA和SOD测定

1.5.1　血清MDA测定　按说明书配好工作液,采

集血液,3000r/min离心,所得上层血清用于MDA测定。剩余血清置于-20℃保存。加试剂和样品,离心、旋涡充分混匀,95℃恒温水浴40min,流水冷却,3500～4000r/min离心10min,波长旋扭调至532nm,测定待测样品(标准管、标准空白管、测定管),并记录所得光密度值。

1.5.2　血清SOD测定　按说明书配好工作液,采

2.2　肝脏中AhR表达的情况　①肝细胞胞浆中AhR表达的变化。对照组肝脏中AhR主要存在于

集血液,3000r/min离心,所得上层血清用于SOD测定。剩余血清置于-20℃保存。用羟胺法测定血清中SOD,波长为550nm。

1.6　肝脏中AhR的检测　用二步法(非生物素系

胞浆中,极少量存在于胞核内;细胞浆内Dioxin组

AhR的表达量随着时间变化呈增加的趋势,相对于对照组4d时数量明显减少,差异显著,8、12、16d时明显增加,第8天左右AhR的量恢复到正常水平,12、16d差异极显著;Dioxin+FRS组减少和增加的趋势较Dioxin组缓慢,除第8天其余差异显著,如图3所示

。

统)检测肝脏中的AhR。镜检免疫组化染色切片,阳性反应信号呈棕褐色或棕黄色着染。检测指标与方法:每个样品取5个视野,40倍物镜下观察免疫组化阳性物的分布,使用MoticMed6.0数码图像分析软件测定以上样品阳性物质所占的面密度,并利用SPSS软件进行均数运算和方差分析,分析试验组和对照组数据之间的差异显著性。1.7　统计与分析　利用SPSS软件对试验数据进行统计分析,组间差异采取显著性t检验分析。2　结果2.1　血清自由基测定结果

2.1.1　血清MDA测定结果　由图1可知,Ⅰ、Ⅲ组血清中MDA水平明显低于Ⅱ组,差异极显著(P<0.01)。

图3　肝细胞胞浆中AhR积分光密度(n=6)

　　②肝细胞胞核内AhR表达的变化。肝脏对照

组中胞核内有极少量存在,Dioxin组4、8、12、16d核内的表达量随着时间的变化明显增加,差异极显