蕙兰的无菌播种及根状茎培养技术研究

蕙兰的无菌播种及根状茎培养技术研究

[摘要]蕙兰是一种具有很高商业价值的兰科植物，传统上采用分株繁殖。研究其果实的发育时间和预处理方式对种子无菌萌发的影响，发现授粉后120d，种子的萌发率最高(为2.7%)，而0.1mol·L-1NaOH溶液对提高种子的萌发率没有明显作用。进而讨论了不同因素对蕙兰根状茎增殖的影响，结果表明：MS+NAA0.5mg/L+BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L或B5+NAA0.5mg/L+BA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L的培养基最适于根状茎的增殖。

[关键词]蕙兰 无菌播种 根状茎 组织培养

一、前言

近年来，墨兰、建兰的组织培养报道渐多,而关于蕙兰的报道则少见。本文探讨了其果实成熟度和NaOH溶液预处理方式对蕙兰种子萌发的影响，并由种子诱导出了发育良好的根状茎。进而研究了不同的培养基类型和NAA与BA的浓度配比对根状茎增殖的影响，提出了适合根状茎增殖的培养基配方，还繁殖出少量完整植株，为实现中国兰的大规模工厂化育苗提供科学依据和技术支持。

二、实验材料和方法

（一）实验材料

供试材料为经人工授粉后采收的盆栽蕙兰的蒴果。

（二）实验方法

1．人工授粉和蒴果采收。选取生长健壮、无病虫害的蕙兰植株作为母本。要求苗数在10苗左右，花葶3枚以上。按照程式君（1984）的方法，在母株开花之前事先收集另一蕙兰植株的花粉块放在滤纸上，卷成筒状，放在小瓶中，塞紧，置于干燥器内，放在4℃冰箱中保存。在母本花葶上每朵小花开放的第二天，除去其自身的花粉块，授以预先收集的花粉，每一花葶上保留2～3个发育良好的蒴果。将蒴果分为四组，分别于授粉后的第60、120、180、240d采收，供后续实验之需。

2．种子的无菌播种和原球茎的诱导。将采收的未开裂蒴果置于流水下冲洗干净，在超净工作台上先用70%的酒精浸泡1min，再用0.1%升汞溶液浸泡15min，无菌水冲洗5次。然后将消毒后的蒴果纵切为二，用镊子夹取着生于侧膜胎座上的种子，置于盛有无菌水的小烧杯中，使种子悬浮于无菌水上部，再用滴管将其移入培养基中，轻摇培养瓶，使种子均匀分布在培养基上。此外，另取一组种子，用0.1mol·L-1的NaOH溶液进行10、20、30min的浸泡预处理，消毒后接种于