核酸的分离与纯化_百替生物(16)

与oligo(dT)-纤维素形成稳定的RNA-DNA杂交体，洗去未结合的其它RNA，然后在低盐缓冲液中洗脱并回收poly(A)+RNA。从哺乳动物细胞提取大量的非放射性RNA 时，oligo(dT)-纤维素柱层析法是首选方法，回收的poly(A)+RNA量可达总RNA的1%～10%。但该法分离速度慢，易阻塞，不适合同时对多个标本的处理，而且很难回收全部的poly(A)+RNA，故不适合对少量RNA样品的分离。

（二）oligo(dT)-纤维素液相结合离心法

为适应同时对多个标本进行处理的要求，应选用批量的层析法。oligo(dT)-纤维素液相结合离心法不经填柱，而是直接将oligo(dT)-纤维素加入到一系列的含不同RNA样品的微量离心管中，通过离心收集吸附有poly(A)+RNA的oligo(dT)-纤维素，经漂洗后，用含70%的乙醇洗脱液将吸附的poly(A)+RNA从oligo(dT)-纤维素上洗脱并沉淀出来。该法可同时批量处理多个样品，而且能从少量的RNA样品中分离出poly(A)+RNA。用本法分离poly(A)+RNA时，应选用等级较高的oligo(dT)-纤维素，如oligo(dT)18-30纤维素，而一般的柱层析填充的是oligo(dT)12-18纤维素。

（三）其它方法

磁珠分离法则联合利用了oligo(dT)与poly(A)的互补配对特性、生物素（biotin）与链亲和素（streptavidin）的特异性结合以及磁性分离原理，对poly(A)+RNA进行高效、灵敏、快速的分离（图6-4）。其产量甚至比常规的oligo(dT)-纤维素柱层析法还高，且分离的poly(A)+RNA能用于几乎所有的分子生物学实验。但它对组织或细胞的最大处理量每次不超过1克，而且磁珠很贵并需要专门的磁性分离架。