鸡胚培养和细胞培养(10)

鸡胚培养

间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血

清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的

BSS，如：D-Hanks液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止

胰酶对细胞的作用。

1.称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入

小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。搅拌混匀，置于4℃内过夜。

2.用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米

微孔滤膜）抽滤除菌。然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。

四.青、链霉素溶液的配制于消毒

1.所用纯净水（双蒸水）需要15磅高压20分钟灭菌。

2.具体操作均在超净台内完成。青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml灭菌双

蒸水。链霉素是100万单位/瓶，加5ml灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位。

3.使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度最终为100单位/ml。1单位＝1微克？

五.RPMI1640的制备与消毒：

1.溶解、调PH值、定容：先将培养基粉剂加入培养液体积2/3的双蒸水中,并用

双蒸水冲洗包装袋2-3次(冲洗液一并加入培养基中),充分搅拌至粉剂全部溶解,并按照包装说明添加一定的药品.然后用注射器向培养基中加入配制好的青链霉

素液各0.5ml, 使青链霉素的浓度最终各为100单位/ml。然后用一个当量的盐

酸和NaOH调PH到7.2左右。最后定容至1000ml，摇匀。

2.安装蔡式滤器：安装时先装好支架，按规定放好滤膜，用螺丝将不锈钢滤器和

支架连接好。然后卸下支架腿分别用布包好待消毒。

3.抽滤：配制好的培养液通常用滤器过滤除菌。通常用蔡式滤器在超净工作台内

过滤。

4.分装：将过滤好的培养液分装入小瓶内置于4℃冰箱内待用。

5.使用前要向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液（4℃时两周有效）。

六．血清的灭火：

细胞培养常用的是小牛血清，新买来的血清要在56℃水浴中灭火30分钟后，再