鸡胚培养和细胞培养(12)

鸡胚培养

十. Ⅰ型胶原酶：

0.1％Ⅰ型胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制和消毒灭菌。注意：因为Ⅰ型胶原酶

分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。分装入10ml

小瓶-20℃保存。

十一.明胶溶液：

因为明胶难于过滤，所以配制0.1％明胶溶液必须用无菌的PBS配制。所以制备

过程中必须要注意无菌操作。首要的问题是如何无菌准确称量0.1克（配成100ml

溶液）—即解决无菌分装药品的问题。其次要注意即使是01.的溶液，明胶也难

溶，因此要充分摇匀，过夜放置，然后无菌分装入50ml小瓶中，4℃保存。

其他培养用液的配制：

20ug/ml内皮生长因子，

注意事项：

1.配制溶液时必须用新鲜的蒸馏水。

2.安装蔡式滤器时通常使用孔径0.45微米 和0.22微米滤膜各一张，放置位置

为0.45的位于0.22微米的滤膜上方，并且要特别注意滤膜光面朝上。

3.配制RPMI1640培养基时因为还要加入小牛血清，而小牛血清略偏酸性，为了

保证培养液PH值最终为7.2，可在配制时调PH至7.4。

细胞传代培养（消化法）

具体操作：

一. 传代前准备：

1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入

37℃水浴锅内预热。

2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

3.正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。

4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消

毒。

6.取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方