鸡胚培养和细胞培养(17)

鸡胚培养

4.置于液氮罐中长期保存。

5同时做好冻存记录，在自己的笔记本和冻存记录本上均要记录。

注意事项：

1.使用DMSO前，不需要进行高压灭菌，它本身就有灭菌的作用。高压灭菌反而

会破华它的分子结构，以至于降低冷冻保护效果。在常温下，DMSO对人体有害，故在配制时最好戴上手套操作。

2.不宜将冻存细胞放置在0℃～-60℃这一温度范围内过久，低温损伤主要发生

在这一温度区内，是“危险温区”。

3.注意定期检查液氮罐内液氮量，及时添加。

鸡胚原代细胞培养（鸡胚成纤维细胞的制作）

取9-11日龄的鸡胚，将胚蛋气管端向上，用碘酊、酒精消毒气室，以镊子击碎

卵壳并弃之，沿气室周围剪去卵壳，撕去壳膜和绒毛尿囊膜，取出胚胎于灭菌平

皿中。剪去头部、翅爪及内脏，以Hanks液冲洗体表数次，移入灭菌小瓶中，在

用剪刀剪成小块，使其成为约1mm3大小的碎块，以Hanks液冲洗体表数次；自

水浴中取出预热的0.25%胰酶适量，一个鸡胚约需5ml胰酶，37℃水浴消化15-20

分钟，其间每5分钟轻摇一次，至液体变得混而稍稠，此时再轻摇可见组织块悬

浮在液体内而不易下降时则终止消化，吸弃胰酶，再以Hanks液冲洗三次，经大

口吸管吹打分散，以少许营养液（DMEM培养液、10%犊牛血清、青链霉素500U/ml，PH7.2-7.4）轻轻悬浮，经8层纱布过率，收集的细胞经计数调整细胞浓度至106

个/ml，混匀，分装于细胞培养瓶中，于CO2培养箱中37℃培养24h-48h。长成

单层的细胞换液，加入维持液：DMEM培养液、5%犊牛血清、青链霉素500U/ml，

PH7.2

第三章 电子显微镜技术观察病毒（2学时）

教学目的：熟悉掌握病毒的电子显微镜观察技术。

教学重点：样品的基本制备技术。

教学难点：病毒电镜样品的制备。

基本教学内容：