鸡胚培养和细胞培养(11)

鸡胚培养

经过抽滤方可加入培养基中使用。

七.HEPES溶液：

HEPES的化学全称位羟乙基呱嗪乙硫磺酸（N’-a-hydroxythylpiperazine-N’- ethanesulfanic acid ）。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长

时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L，一般培养液内含

20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。

1mol/L HEPE缓冲液配制方法如下：

准确称取HEPTS 238.3g，加入新鲜三蒸水定容至1L。过滤除菌，分装后4℃保

存。

注意：因为现在市售HEPES为约10g包装的小瓶，所以可根据实际情况灵活配制，但是要保证培养液内HEPES的终浓度仍然为20m mol/L 。如：称取4.766克HEPES

溶于20ml三蒸水中，过滤除菌后可完全（20ml）加入1L培养液中，或者每100ml

培养液中加入2ml即可。

八.谷氨酰胺：

合成培养基中都含有较大量的谷氨酰胺，其作用非常重要，细胞需要谷氨酰胺合

成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏要导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养

液中都应该补加一定量的谷氨酰胺。由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃下放

置1周可分解50％，故应单独配制，置于-20℃冰箱中保存，用前加入培养液。

加有谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时，应重新加入原来的谷氨酰

胺。

一般培养液中谷氨酰胺的含量为1～4mmol/L。可以配制200mmol/L谷氨酰胺液

贮存，用时加入培养液。配制方法为，谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml

即配成200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后，过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存，使用时可向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液。

九.肝素溶液的配制：

含有肝素的培养液可以使内皮细胞纯度提高，肝素加入全培养液中最终浓度为

50ug/ml。因为现在市售的多为肝素钠，包装为约为0.56克/瓶，配制时，可将

其溶于100ml三蒸水中，定容，过夜，然后过滤除菌，分装小瓶，保存温度为 ℃ 。使用时，向100ml培养液中加入1ml（精确可加入0.9ml）即可。