鸡胚培养和细胞培养(16)

鸡胚培养

4.统计四个大格的细胞数：将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察，并移

动计数板，当看到镜中出现计数方格后，数出四角的四个大铬（每个大格含有

16个中铬）中没有被染液染上色的细胞数目。

5.计算原细胞悬液的细胞数:按照下面公式计算细胞密度：

（细胞悬液的细胞数）/ml＝ （ 四个大格子细胞数/4) ×2×104

说明：公式中除以4因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以2因为细胞悬液于染液是1：1稀释。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：四.细胞计数要点：

1.进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于104个/ml，如果细胞数目很

少要进行离心再悬浮于少量培养液中；

2.要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。

3.取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其时多次取样计数时更要注意每次

取样都要混匀，以求计数准确；

4. 数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计

算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计右线，不计左线。

5. 操作时，注意盖片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重

新计数。

五.初学者易犯的错误：

1. 计数前未将待测悬液吹打均匀。

2. 滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。

3. 滴入悬液时的量太多，至使细胞悬液流入旁边的槽中。

六.本实验特殊试剂的配制：

4％台盼蓝母液：称取4克台盼蓝，加入少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100毫升，用滤纸过滤，4℃保存。

使用液：使用时，用PBS稀释母液至0.4％即可。

细胞的冻存

1.先将冻存管放入4℃冰箱，约40min。

2.接着置于-20℃冰箱，约30-60min。

3.置于-80超低温冰箱中放置过夜。