鸡胚培养和细胞培养(15)

鸡胚培养

六.细胞计数：

细胞浓度以5×105/ml为宜。

七.培养细胞

将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入37℃和5％

CO2的培养箱内2-4小时（或者24-48小时）后换液继续培养培养，换液的时间

由细胞情况而定。

初学者易犯错误：

1水浴锅未预热或者未预热到37℃。

2.水浴锅内冻存管太多，导致传热不佳，使融化时间延长。

3.离心前忘记平衡，导致离心机损坏和细胞丢失。

4.一次复苏细胞过多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。

细胞计数

实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞

的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：

一.准备工作：

取一瓶传代的细胞，按照《传代细胞培养（消化法）》中的传代方法繁殖细

胞，待长成单层后以被使用。

二.细胞悬液制备：

细胞悬液的制备方法是用0.25％的胰蛋白酶液消化、PBS液洗涤后，加入培养液

（或Hanks液或PBS等平衡盐溶液），吹打制成待测细胞悬液。

三.细胞计数：

1.盖好盖玻片：取一套血球计数板，将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。

2.制备计数用的细胞悬液：用吸管吸5滴细胞悬液到一离心管中，加入5滴

台盼蓝染液（0.4％）或苯胺黑，活细胞不会被染色，加入染液后就可以在显微

镜下区别活细胞和死细胞。

3.将细胞悬液滴入计数板：将待测细胞悬液吹均匀，然后吸取少量悬液沿盖

片边缘缓缓滴入，要保证盖片下充满悬液，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬

液流入旁边槽中。