鸡胚培养和细胞培养(18)

鸡胚培养

第一节 电子显微镜技术概述

一.电子显微镜的发展

光学显微镜发明后，即成为医学、生物学和其他学科不可缺少的研究工具。可以

看到许多微生物和构成生物的基本单元—细胞。但随着人类认识的逐步深化，对

观察微小物体的要求越来越高。

大型电子显微镜 20~100万倍 0.144~0.34nm

中型电子显微镜 5~20万倍 0.34~1.0nm

小型电子显微镜 5万倍以下 1.0nm以上

二. 电子显微镜的分类

1.透射电子显微镜

2扫描电子显微镜

其主要特点是景深大，图像富有立体感，制样简便，在观察形貌的同时，还可以

利用样品发出的其他信息在微小区域上作成份分析和晶体结构分析。

第二节 电镜样品的基本制备技术

一.超薄切片

超薄切片法是研究病毒特征以及病毒与细胞之间相互作用的有效手段。

a.将组织或细胞样品，加入2.5% PH7.2戊二醛进行前固定，4℃ 24小时；

b.用PH7.2PBS冲洗三次，每次10分钟；

c.用2%四氧化饿在通风橱内进行后固定1.5-2小时；

d. 用PH7.2PBS冲洗三次，每次10分钟；

e.分别用浓度为50%、70%、80%、90%、100%的乙醇进行脱水，每次10-15分钟，100%乙醇中脱水三次，其它浓度中各一次；

f.用1：1的100%乙醇和丙酮、纯丙酮各置换一次，每次10分钟；

g.用纯丙酮和环氧树脂包埋剂按浓度梯度对样品进行浸透；

h.将样品置于恒温培养箱中聚合；