细菌发酵L乳酸的研究(17)

细菌发酵L乳酸的研究

细菌发酵Ｌ（＋）－乳酸的研究

秘拳莩ｓ方法

ＬＤＨ染色贮备液：

（１）５ｍｇ／ｍＬ氧化型辅酶Ｉ溶液：称５０ｍｇＮＡＤ＋，加蒸馏水１０ｍＬ。置棕

色试剂瓶，４℃贮存。

（２）１Ｍ

ＤＬ一乳酸钠溶液：取６０％ＤＬ一乳酸钠９．２５ｍＬ，加蒸馏水定容至

５０ｍＬ。置棕色瓶，４℃贮存。

（３）０．１Ｍ

ＮａＣｌ溶液：称０．５８４９ＮａＣｌ，加蒸馏水溶解并定容至１００ｍＬ。

（４）１ｍｇ／ｍｈ甲硫吩嗪（ＰＭＳ）溶液；称５ｍｇＰＭＳ，加蒸馏水５ｍｌ。使其溶解。

置棕色试剂瓶，４。Ｃ贮存。

（５）ｌｍｇ／ｍＬ氯化硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）溶液：称２０ｍｇＮＢＴ，加蒸馏水２０ｍＬ

使其溶解。置棕色试剂瓶，４。Ｃ贮存。

（６）０．３ｍｏｌ／ＬｐＨ８．０Ｔｒｉｓ－－ＨＣｌ缓冲液

２．４分析方法

２．４．１发酵液中葡萄糖和Ｌ（＋）哥Ｌ酸的测定：

用酶膜生物传感分析仪，其原理是固定化酶能特异性地作用于Ｌ（＋）一

乳酸：

乳酸＋０２＋Ｈ２０－＞固定化Ｌ（＋）乳酸氧化酶－＞丙酮酸＋Ｈ２０２

先用标准溶液标定，然后测定经过离心、稀释１００～２００倍的发酵液（使终浓度在０．５ｍｇ／ｍＬ之内，ｐＨ在６～８左右）由定量进样针吸取２５

ｕ

ｌ，并注

入反应池，含有样品的底物在样品池中迅速按照一定比例混合均匀，底物

透过酶膜圈的外层与固定化酶层接触并反应，反应放出的Ｈ２０２再透过酶膜圈的内层与白金一银电极接触，并产生电流信号，该电流信号与底物浓度成线性比例关系，经微机控制的信号，可直接显示并打印结果。一般误

差小于１％。

２．４．２总酸的测定：

乳酸含量的测定方法主要有：酸碱滴定法、旋光法、ｕｖ酶法、酶电极法、气相色谱法和液相色谱法【３】。酸碱滴定法和旋光法所需费用较低，但影响因素多，

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