细菌发酵L乳酸的研究(20)

细菌发酵L乳酸的研究

钏菌发酵Ｌ（＋）一乳酸的研究

枷辩｜，方法

将乳酸菌从斜面上挑取一环接种于５０ｍＬＭＲＳ种子培养基中，２４ｈｒ后以

１０％接种量接种于一定葡萄糖含量的ＭＲＳ发酵液中，３７。Ｃ静置培养．三天后

用ＥＤＴＡ滴定法滴定乳酸总产量。

２．５．４乳酸产量与光学纯度的测定

对筛选到的高产量菌株，需鉴定产物的Ｌ（＋）一乳酸光学纯度。

（１）用ＥＤＴＡ滴定法测定发酵液中的总乳酸含量：取乳酸发酵液，用滤纸过

滤或经离心，获得清液，精确吸取ｌｍＬ过滤液到２５０ｍＬ三角瓶中，加

蒸馏水１０ｍＬ，５％的ＮａＯＨ１０ｍＬ，钙红指示剂约Ｏ．１９。用Ｏ．０５ｍｏｌ／Ｌ的

ＥＤＴＡ溶液滴定，当溶液由紫红色变为纯兰色，即为终点。原发酵液中产乳酸相当于Ｏ．９１％乳酸／ｍＬＥＤＴＡ。

（２）用酶膜生物传感仪测定发酵液中的Ｌ（＋）乳酸含量。

（３）

以Ｌ（＋）乳酸厚Ｌ酸的值鉴定产物中乳酸的光学纯度，挑选只产生Ｌ（＋）

一乳酸的菌株。

（４）对以上菌株的发酵液做反相高压液相色谱分析，测定总乳酸含量，同法

比较二者数值的求其光学纯度；印证。

（５）蛋白电泳分析菌体中乳酸脱氢彰５９ｍｌ。

培养菌体至对数生长期，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，去上清，用０．０５Ｍ、ｐＨ７的磷酸缓冲液洗涤菌体，超声波破碎。将蛋白溶液离心后取上清作蛋白电泳。以上操

作均在４℃下进行。

①菌体蛋白的ＳＤＳ－－ＰＡＧＥ…１

②聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶（活性染色鉴定法）…１

采用不连续ＰＡＧＥ。按照下表的顺序，在染色前将有关试剂混合制成２５ｍＬＬＤＨ活性染色液。

２，６菌种鉴定１２９ｑ５Ｉ

用新培养的单菌落制成均匀的菌悬浮液作为接种物。依据伯杰氏细菌鉴定手册