细菌发酵L乳酸的研究(21)

细菌发酵L乳酸的研究

细菌发酵Ｌ（十）－乳俄的研究

树摹｝｜，力法

（第八版）以及《乳酸菌的分类及鉴定手册》，对筛选到的出发菌株的各项特征进行实验，确定其分类地位。据已经报道的乳酸菌２３个属检索表测定其生

化特性，进行初步鉴定。其项目包括形态特征，运动性，各项生理生化反应及代谢产物的分析等。

２．７菌种的复合诱变

本文采用化学因子和物理因子交替处理，以期获得高产量的优良菌株。产量的

提高往往是由多基因作用的结果。采用多种不同机制的诱变剂交替使用，可以动摇多种基因的稳定性，造成各种基因功能重新调整而产生丰富多彩的突变类

型，提高变异率１３９ｌ。

诱变程序：出发菌株Ｓ３一Ｕ．Ｖ．一ＮＴＧ一“ｃｌ—ＤＥＳ一突变菌株Ｍ７

２．７．１．菌体生长曲线的绘制：

从斜面取１环菌接种于５０ｍＬＭＲＳ培养基中，３７。Ｃ培养２４｝ｌｒ，以１０％接种量

接入１００ｍＬＭＲＳ培养基中，３７＂Ｃ培养，每隔２ｈｒ取样，做适度稀释后测定ＯＤ６２０

值。

２．７．２

Ｕ．Ｖ处理【６５“８ｌ

（１）菌悬液的制备

培养乳酸菌至对数生长期，取１０ｍＬ对数生长期的培养液，４０００ｒ／ｍｉｎ离心

１０ｍｉｎ，收集菌体，用１０ｍＬ生理盐水洗涤离一心２次，之后将菌体悬浮于１２ｍＬ

生理盐水中。取ｌｍＬ菌液稀释后涂于ＭＲＳ固体平板上，３７＂Ｃ培养４８～７２ｈｒ

计数。

（２）致死曲线的绘制及诱变处理

１５Ｗ紫外线灯，箱底放置磁力搅拌器一台，紫外灯至搅拌器载物台面距离约２０ｃｍ。先开启紫外灯预热约２０ｍｉｎ，使光波稳定并使空气灭菌；然后取约】０ｍＬ

菌悬液置于灭过菌的并带有磁力搅拌器的平皿中，无菌条件下，开启磁力搅拌

器，打开皿盖，照射３０Ｓ至５ｍｉｎ，分别取样稀释后涂平板，避光培养测定存

活细菌浓度，绘制Ｕ．Ｖ照射致死曲线。

将菌液紫外处理致死率７０～８０％的照射时间后加入于新鲜种子培养液中，避